Cromatografía de espinacas
Introducción: Alex Krzyston .Cromatografía. Alex J Krzyston .Cromatografía. Alexander James Krzyston
En este experimento se trató de obtener el espectro visible de clorofila A y beta-caroteno.
NORTHWESTERN UNIVERSITY .Cromatografía. EVANSTON .Cromatografía. BURR RIDGE
Se utilizó la espinaca como una fuente tanto de clorofila a y beta-caroteno. Se utilizó cromatografía en columna para extraer y separar la clorofila a y beta-caroteno a partir de la espinaca. Nuestra columna de cromatografía consistió en lana de vidrio, arena, diatomita, puesto polar absorbente y más arena. Debido a que el beta caroteno es menos polar que la clorofila a, que fue menos atrajo a la, gel de sílice absorbente polar, el cual se utilizó en la cromatografía en columna. Como resultado de ello, que fluía a través de la columna más rápidamente que la clorofila a, y así se recogió primero. Cuando se utiliza en combinación con éter de petróleo, un disolvente no polar, este proceso se acelera porque al igual que disuelve a similar, por lo que la no polar beta-caroteno se disolvió fácilmente en el éter de petróleo no polar, ya que fluía por la columna. Debido a que la clorofila a, una sustancia polar, fue más atraído por el gel de sílice polar, acetona, un disolvente polar, se utilizó para acelerar el flujo de la clorofila a abajo de la columna por la misma razón que el éter de animal doméstico se utiliza para acelerar el flujo de beta-caroteno por la columna. Una vez que los dos se separaron y se recogen, se utilizó el Espectrofotómetro UV-vis para medir su absorbancia.
Procedimiento:
El procedimiento fue el mismo que el que figura en el manual de laboratorio
* En la Parte 1: Tratamiento espinaca, en lugar de molienda 25 g de espinacas con 50 ml de una mezcla de éter / acetona para mascotas 80/20, nosotros, los primero 25 g de tierra de espinacas con 25 ml de la mezcla y luego añaden más y más de la mezcla (aproximadamente 60 ml en total) que a extraer la mayor cantidad de beta-caroteno y clorofila posible.
Datos:
Masa de Espinaca: 25.3850g
La clorofila A (verde)
Longitud de onda λ (nm) Absorbancia
Pico 413,52 0,7777
431,03 0,7987
664,71 0,4512
Beta-caroteno (amarillo)
Longitud de onda λ (nm) Absorbancia
Pico 447,88 0,2824
475.08 0,191
Discusión:
1. Si se utiliza acetona como el primer disolvente para eluir el extracto en lugar de éter de petróleo, clorofila a y beta-caroteno no habría sido separados adecuadamente por la columna de la cromatografía. Esto es porque, el beta-caroteno es no polar y el gel de sílice utilizado como el absorbente es polar. En contraste, la clorofila a es polar. Como resultado, la clorofila a fue más atraído por el gel de sílice que el beta-caroteno. Debido a éter de petróleo es no polar, beta caroteno disuelve fácilmente en él a medida que fluía por la columna, esta se aceleró el flujo de beta-caroteno, Debido a acetona es polar, clorofila a se disolvió fácilmente en ella a medida que fluía por la columna, mejorar el flujo de la clorofila a abajo de la columna. Debido beta-caroteno menos atraído por el gel de sílice, que era el padre de la columna de clorofila a se añadió antes de cualquier disolvente. Si acetona se ha añadido antes de éter de petróleo, la clorofila se habría mezclado con el beta-caroteno, ya que viajó a través de la columna.
2. Una alta tasa de abandono de la columna podría ocurrir si se utilizó un absorbente inadecuada que no era ni atractivo a la clorofila a o el beta-caroteno. Una tasa de abandono más alta también puede ser causada por una preparación inadecuada del gel de sílice, por ejemplo, si era demasiado aguados. Tampoco el uso de arena suficiente o si se utiliza el disolvente fue extremadamente no polar, ya que no tendría ninguna atracción por el gel de sílice polar.
3. Tanto el aumento del diámetro de la columna de absorbente y el aumento de la longitud de la columna de absorbente mejorará las separaciones cromatográficas. Ambos de estos aumentará el área de superficie de la columna que significa que la solución tendrá un área mayor sobre la cual a separar. Si sólo hay un cambio se puede realizar a continuación, el aumento de la longitud de la columna sería el más eficiente, porque dará a la solución de una longitud más larga y por lo tanto más tiempo durante el cual se separe.
4. Beta-caroteno
λmax = 475.08nm
c = λν
3,00 x 108 = ν (4.7508 × 10-7)
6,3147 × 1,014 = ν
hv =? E
6,626 × 10-34 (6,3147 × 1,014) =? E
4,1841 × 10-19 J =? E
? E = h2
8mL2
Beta-caroteno tiene 40 átomos de carbono, por lo tanto, n = 20
4,1841 × 10-19 J = (6,626 × 10-34) 2
8 (9.109 × 10-31) L2
L = 2,4298 × 10-9m
El valor real de L = 2.6 × 10-9m
Error porcentual = (2,6 × 10-9 - 2.4298 × 10-9)
2,6 × 10-9
= 6,5%
Beta-caroteno tiene 11 carbonos sp2-hibridación. Tiene 11 dobles enlaces de carbono todos los cuales son hibridado en sp2.
En esta práctica, la parte más difícil fue el ajuste de la columna de cromatografía. En nuestra columna que tenía algunas burbujas de aire en el gel de sílice que se tradujo en una tasa de abandono menor.
Fuentes de error en este laboratorio podría resultar a partir del extracto de beta-caroteno está demasiado diluida, porque el éter de petróleo se evapore rápidamente y la cantidad de beta-caroteno que obtuvimos a partir de la columna de la cromatografía no fue suficiente para medir con el espectrofotómetro UV-vis así que tuvimos que diluir el beta-caroteno con éter de petróleo. Otras fuentes de error podrían ser de la espinaca no ser lo suficientemente seca. La espinaca no era seco, pero recientemente se ha descongelado por lo que todavía estaba parcialmente congelado y hielo. Esto hizo que nuestra solución sea más acuosa. Ambas tesis, una solución acuosa y diluida apuesta-caroteno, se traduciría en una menor absorción y por tanto una longitud de enlace más pequeño, que es lo que ocurrió en nuestro caso. Además, incluso antes de añadir el extra de éter de petróleo al extracto de beta-caroteno, el beta-caroteno era de color pálido que muy probablemente de no obtener suficiente de la espinaca cuando molían en el mortero. Esto daría lugar a una absorbancia inferior y por lo tanto una longitud de onda más grande, y una frecuencia y energía más baja, lo que resulta en un menor valor de L
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